Abstract

Am examinat efectele inhibitoare ale peptidei HAQ (His-Ala-Gln) asupra alergiei de tip 1 in vitro și in vivo. Peptida HAQ a inhibat eliberarea β-hexosaminidazei și nivelurile intracelulare de Ca 2+ ale celulelor RBL-2H3 de leucemie bazofilă de șobolan. Administrarea orală a unei diete adăugate peptidice HAQ (1 mg/șoarece/administrare) la șoareci C3H/HeJ timp de 14 zile a condus la suprimarea semnificativă a simptomelor alergice, dar nu a redus IgE sau IgG1 specifice alergenului.

tripeptidei

Alergia de tip 1, așa cum este caracterizată de alergiile alimentare și polen, este definită ca o reacție de hipersensibilitate, iar frecvența acesteia crește în întreaga lume. 1) Este necesar să se dezvolte agenți terapeutici care fie să prevină sensibilizarea la alergeni, fie să suprime răspunsul alergic după inițiere. S-a raportat că compușii polifenolici, cum ar fi catehina, prezintă efecte anti-alergice, 2-6), dar au fost puține rapoarte despre peptide. Grupul nostru a raportat anterior că tripeptida HAQ (His-Ala-Gln), care este prezentă în CE90GMM, un amestec de peptide derivat din cazeina din lapte inhibă degranularea celulelor RBL-2H3. 7)

În prezentul studiu, am examinat efectele antialergice ale peptidei HAQ in vitro și in vivo. Pentru a evalua efectele in vivo, am efectuat administrarea orală de peptidă HAQ la un model de șoarece de alergie alimentară mediată de tip 1 la lizozima din albușul de ou de găină (LHE).

Peptida HAQ sintetizată artificial (> 95% puritate) a fost achiziționată de la Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SUA). Celulele RBL-2H3 au fost menținute în mediul Eagle modificat de Dulbecco (Nacalai Tesque, Tokyo, Japonia) cu 10% (v/v) ser de vițel fetal (Sigma-Aldrich), 100 U/ml penicilină (Nacalai Tesque) și 100 μg/mL streptomicină (Nacalai Tesque) la 37 ° C într-o atmosferă umidificată conținând 5% CO2.

Publicat online:

FIG. 1. Efectele peptidei HAQ asupra eliberării β-hexosaminidazei (A), a viabilității celulare (B) și a [Ca 2+]eu (C) a celulelor RBL-2H3. (A) Celulele RBL-2H3 sensibilizate la IgE specifice DNP au fost provocate cu DNP-HSA timp de 30 de minute. Peptida HAQ a fost adăugată la 10 minute înainte de provocarea antigenului. (B) Viabilitatea celulară a fost măsurată utilizând soluția SF de reactiv cu număr de celule după ce s-au adăugat diferite concentrații de peptidă HAQ la celulele RBL-2H3 anti-DNP IgE sensibilizate, urmate de stimulare cu DNP-HSA. (C) [Ca 2+]eu a fost măsurată prin Calcium Kit-Fluo-3. Celulele sensibilizate la IgE anti-DNP au fost incubate cu Fluo-3 AM timp de 1 oră și apoi incubate cu peptidă HAQ 500 μM sau PBS timp de 10 min. Apoi, celulele tratate au fost stimulate cu DNP-HSA și s-a măsurat intensitatea fluorescenței. (○), celule tratate cu peptide non-HAQ, care nu sunt sensibilizate cu IgE anti-DNP; (▲), celule tratate cu peptide HAQ stimulate cu antigen; (●), celule non-tratate cu peptide HAQ stimulate cu antigen.

FIG. 1. Efectele peptidei HAQ asupra eliberării β-hexosaminidazei (A), a viabilității celulare (B) și a [Ca 2+]eu (C) a celulelor RBL-2H3. (A) Celulele RBL-2H3 sensibilizate la IgE specifice DNP au fost provocate cu DNP-HSA timp de 30 de minute. Peptida HAQ a fost adăugată la 10 minute înainte de provocarea antigenului. (B) Viabilitatea celulară a fost măsurată utilizând soluția SF de reactiv cu număr de celule după ce s-au adăugat diferite concentrații de peptidă HAQ la celulele RBL-2H3 anti-DNP IgE sensibilizate, urmate de stimulare cu DNP-HSA. (C) [Ca 2+]eu a fost măsurată prin Calcium Kit-Fluo-3. Celulele sensibilizate la IgE anti-DNP au fost incubate cu Fluo-3 AM timp de 1 oră și apoi incubate cu peptidă HAQ 500 μM sau PBS timp de 10 min. Apoi, celulele tratate au fost stimulate cu DNP-HSA și s-a măsurat intensitatea fluorescenței. (○), celule non-tratate cu peptide HAQ, care nu sunt sensibilizate cu IgE anti-DNP; (▲), celule tratate cu peptide HAQ stimulate cu antigen; (●), celule non-tratate cu peptide HAQ stimulate cu antigen.

Notă: datele sunt prezentate ca medie ± SD (n = 5). *p